CROMATOGRAFIA
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES POR
CROMATOGRAFÍA DE PAPEL
INTRODUCCIÓN
Los cloroplastos poseen una mezcla de
pigmentos con diferentes colores: clorofila (verde intenso), clorofila-b
(verde), carotenos (amarillo claro) y xantofilas (amarillo anaranjado) en
diferentes proporciones. Todas estas sustancias presentan un grado diferente de
solubilidad en disolventes apolares, lo que permite su separación cuando
una solución de las mismas asciende por capilaridad a través de una tira de
papel poroso (papel de cromatografía o de filtro) dispuesta verticalmente sobre
una película de un disolvente orgánico (etanol), ya que las mas solubles se
desplazaran a mayor velocidad, pues acompañaran fácilmente al disolvente a
medida que esta asciende. Las menos solubles avanzaran menos en la tira de
papel de filtro.
Aparecerán, por lo tanto, varias bandas
de diferentes colores (hasta siete o más, dependiendo del material utilizado)
que estarán más o menos alejados de la disolución alcohólica según la mayor o
menor solubilidad de los pigmentos. Estas bandas poseerán diferente grosor,
dependiendo de la abundancia del pigmento de la disolución.
MARCO TEORICO
1.1.
Cromatografía en papel.
Se basa en la diferencia de velocidad
al desplazarse los distintos pigmentos sobre una banda de papel poroso. Los
pigmentos deben estar previamente disueltos en un disolvente. Los más solubles
se desplazarán más deprisa y los menos solubles más despacio, apareciendo sobre
el papel diferentes bandas de color. Para comprobarlo se ha utilizado un
extracto de hoja de espinaca disuelto en etanol y otro de hoja de lombarda
disuelto en acetona. De abajo arriba, con el extracto de espinaca se observan
las siguientes bandas: clorofila a (verde claro), clorofila b (verde oscuro),
xantofilas (amarilla) y carotenos (anaranjada). Con el de lombarda: clorofilas
(verde), xantofilas (amarilla) y antocianinas (morada).
1.2.
Cromatografía en tubo de ensayo:
Se basa en la diferencia de solubilidad de los
pigmentos. Con una mezcla de disolventes de distinta densidad, podemos
conseguir
Que los diferentes pigmentos se separen
en bandas, ya que cada tipo de pigmento es soluble en un tipo de disolvente.
Utilizando el mismo extracto que en el caso anterior se añade éter y agua
destilada al extracto de espinaca, y benceno y agua destilada al de lombarda.
Con el extracto de la espinaca se obtienen tres bandas: xantofilas (abajo),
clorofila b y clorofila a (arriba). En el caso de la lombarda se obtienen:
antocianinas (abajo), xantofilas y clorofilas (arriba).
Los colores de las plantas se deben a
la combinación de los diferentes pigmentos que contienen. Para aislar y extraer
dichos pigmentos se pueden utilizar diferentes procedimientos. Uno de ellos es
la cromatografía, que consiste en la separación en bandas de los diferentes
pigmentos en función de su solubilidad. En esta experiencia se han utilizado
dos técnicas:
Los pigmentos que dan color a las
plantas se encuentran en el interior de unos orgánulos celulares llamados
cromatóforos y vacuolas.
Los cromatóforos son orgánulos de forma
ovoide rodeados por una doble membrana que almacenan pigmentos liposolubles.
Pueden ser de distintos tipos:
·
Cloroplastos: Presentes en las hojas
verdes y responsables de la fotosíntesis. Contienen varios tipos de pigmentos:
clorofilas, de color verde; carotenos, de color rojo-anaranjado, y xantofilas,
de color amarillo.
·
Cromatóforos
no fotosintéticos: Contienen carotenos y
xantofilas, responsables de los colores amarillo, naranja y rojo de muchas
flores y frutos.
·
Leuco
plastos: Son incoloros, aunque pueden almacenar sustancias,
como el almidón, que les dan una coloración blanquecina. Aparecen en hojas
variadas y en órganos de reserva como raíces o rizomas, además de en plantas
parásitas.
OBJETIVOS
ü
Poner en manifiesto el
principio de operación de la
cromatografía en papel.
ü
Extraer los pigmentos
fotosintéticos y separarlos mediante una técnica sencilla de cromatografía en
papel.
ü
Familiarizar a los alumnos
con algunas técnicas de separación de sustancias.
ü
Favorecer la comprensión de
lo que es una disolución y del concepto de solubilidad.
ü
Separar y observar los
distintos pigmento s que intervienen en el proceso fotosintético
MATERIALES
Vaso Becker
Tijeras
Pipeta
Mortero
Agua Destilada
Gradilla
Hoja de geranio
Hoja de espinaca
Alcohol
Bencina
Fundamento
Teórico
Los
cloroplastos deben su color verde al pigmento clorofila. Sin embargo lo que
realmente existe en los cloroplastos es una mezcla de pigmentos: Clorofila a,
clorofila b, carotenos y xantofilas.
Todas
esas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad, 10 cual permite su
separación ascendiendo por capilaridad por una tira de papel de filtro. Las más
solubles se desplazaran a mayor velocidad, pues acompañaran fácilmente al
disolvente a medida que este va ascendiendo, mientras que las menos solubles se
desplazaran más lentamente. De esta forma, al cabo de un tiempo, a 10 largo del
papel poroso se irán situando los distintos pigmentos s, y las bandas
coloreadas serán tanto más anchas cuanto mayor sea la abundancia de ellas en la
mezcla.
PROCEDIMIENTO
Para el
desarrollo de esta práctica seguimos los siguientes pasos:
Colocamos
los materiales y las muestras sobre la mesa de trabajo.
Lavamos las hojas de geranio y espinacas,
retiramos los nervios y las colocamos en
un mortero.
Luego añadimos alcohol hasta que cubra
parcialmente las hojas y agregamos una pequeña cantidad de carbonato cálcico
(CaCO3)
Trituramos la mezcla hasta que las hojas se
decoloren y el disolvente adquiera un color verde intenso.
Vertimos el líquido de color intenso en un vaso
Becker para su posterior filtrado
Filtramos con un embudo y papel de filtro sobre
un tubo de ensayo.
Posteriormente Colocamos el filtrado en un tubo
de ensayo, y sobre ella ponemos un papel cromatografía
Dejamos así el montaje y esperar unos minutos.
Los pigmentos se irán separando según su adsorción. 
