sábado, 21 de enero de 2012

CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFIA
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES POR CROMATOGRAFÍA DE PAPEL




INTRODUCCIÓN
   

Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila (verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos (amarillo claro) y xantofilas (amarillo anaranjado) en diferentes proporciones. Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en disolventes apolares,   lo que permite su separación cuando una solución de las mismas asciende por capilaridad a través de una tira de papel poroso (papel de cromatografía o de filtro) dispuesta verticalmente sobre una película de un disolvente orgánico (etanol), ya que las mas solubles se desplazaran a mayor velocidad, pues acompañaran fácilmente al disolvente a medida que esta asciende. Las menos solubles avanzaran menos en la tira de papel de filtro.
Aparecerán, por lo tanto, varias bandas de diferentes colores (hasta siete o más, dependiendo del material utilizado) que estarán más o menos alejados de la disolución alcohólica según la mayor o menor solubilidad de los pigmentos. Estas bandas poseerán diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento de la disolución.

MARCO TEORICO

1.1. Cromatografía en papel.
Se basa en la diferencia de velocidad al desplazarse los distintos pigmentos sobre una banda de papel poroso. Los pigmentos deben estar previamente disueltos en un disolvente. Los más solubles se desplazarán más deprisa y los menos solubles más despacio, apareciendo sobre el papel diferentes bandas de color. Para comprobarlo se ha utilizado un extracto de hoja de espinaca disuelto en etanol y otro de hoja de lombarda disuelto en acetona. De abajo arriba, con el extracto de espinaca se observan las siguientes bandas: clorofila a (verde claro), clorofila b (verde oscuro), xantofilas (amarilla) y carotenos (anaranjada). Con el de lombarda: clorofilas (verde), xantofilas (amarilla) y antocianinas (morada).

1.2. Cromatografía en tubo de ensayo:

 Se basa en la diferencia de solubilidad de los pigmentos. Con una mezcla de disolventes de distinta densidad, podemos conseguir

Que los diferentes pigmentos se separen en bandas, ya que cada tipo de pigmento es soluble en un tipo de disolvente. Utilizando el mismo extracto que en el caso anterior se añade éter y agua destilada al extracto de espinaca, y benceno y agua destilada al de lombarda. Con el extracto de la espinaca se obtienen tres bandas: xantofilas (abajo), clorofila b y clorofila a (arriba). En el caso de la lombarda se obtienen: antocianinas (abajo), xantofilas y clorofilas (arriba).
Los colores de las plantas se deben a la combinación de los diferentes pigmentos que contienen. Para aislar y extraer dichos pigmentos se pueden utilizar diferentes procedimientos. Uno de ellos es la cromatografía, que consiste en la separación en bandas de los diferentes pigmentos en función de su solubilidad. En esta experiencia se han utilizado dos técnicas:
Los pigmentos que dan color a las plantas se encuentran en el interior de unos orgánulos celulares llamados cromatóforos y vacuolas.
Los cromatóforos son orgánulos de forma ovoide rodeados por una doble membrana que almacenan pigmentos liposolubles. Pueden ser de distintos tipos:

·         Cloroplastos: Presentes en las hojas verdes y responsables de la fotosíntesis. Contienen varios tipos de pigmentos: clorofilas, de color verde; carotenos, de color rojo-anaranjado, y xantofilas, de color amarillo.
·         Cromatóforos no fotosintéticos: Contienen carotenos y xantofilas, responsables de los colores amarillo, naranja y rojo de muchas flores y frutos.
·         Leuco plastos: Son incoloros, aunque pueden almacenar sustancias, como el almidón, que les dan una coloración blanquecina. Aparecen en hojas variadas y en órganos de reserva como raíces o rizomas, además de en plantas parásitas.
OBJETIVOS
 

ü  Poner en manifiesto el principio de operación  de la cromatografía en papel.
ü  Extraer los pigmentos fotosintéticos y separarlos mediante una técnica sencilla de cromatografía en papel.
ü  Familiarizar a los alumnos con algunas técnicas de separación de sustancias.
ü  Favorecer la comprensión de lo que es una disolución y del concepto de solubilidad.
ü  Separar y observar los distintos pigmento s que intervienen en el proceso fotosintético

MATERIALES

Vaso Becker    
Tijeras 
Pipeta                                       
Mortero             
Agua Destilada
Gradilla                                              
Hoja de geranio
Hoja de espinaca           
Alcohol
Bencina

Fundamento Teórico
Los cloroplastos deben su color verde al pigmento clorofila. Sin embargo lo que realmente existe en los cloroplastos es una mezcla de pigmentos: Clorofila a, clorofila b, carotenos y xantofilas.
Todas esas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad, 10 cual permite su separación ascendiendo por capilaridad por una tira de papel de filtro. Las más solubles se desplazaran a mayor velocidad, pues acompañaran fácilmente al disolvente a medida que este va ascendiendo, mientras que las menos solubles se desplazaran más lentamente. De esta forma, al cabo de un tiempo, a 10 largo del papel poroso se irán situando los distintos pigmentos s, y las bandas coloreadas serán tanto más anchas cuanto mayor sea la abundancia de ellas en la mezcla.


PROCEDIMIENTO

 

Para el desarrollo de esta práctica seguimos los siguientes pasos:
*      Colocamos  los materiales y las muestras sobre la mesa  de trabajo.
*      Lavamos las hojas de geranio y espinacas, retiramos  los nervios y las colocamos en un mortero.
*      Luego añadimos alcohol hasta que cubra parcialmente las hojas y agregamos una pequeña cantidad de carbonato cálcico (CaCO3)
*      Trituramos la mezcla hasta que las hojas se decoloren y el disolvente adquiera un color verde intenso. 
*      Vertimos el líquido de color intenso en un vaso Becker para su posterior filtrado
*      Filtramos con un embudo y papel de filtro sobre un tubo de ensayo.
*      Posteriormente Colocamos el filtrado en un tubo de ensayo, y sobre ella ponemos un papel cromatografía
*      Dejamos así el montaje y esperar unos minutos. Los pigmentos se irán separando según su adsorción. 



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